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实验室常用培养基配置 LB LA

时间:2022-06-17 03:59:11

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实验室常用培养基配置 LB LA

LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基

组分浓度:

1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V) Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicillin0.024 mg/ml IPTG0.04 mg/ml X-Gal1.5%(W/V) Agar

配置量:1L配置方法: 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 10gYeast Extract5gNaCl 10g

加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。滴加5N NaOH(约0.2ml),调节PH值至7.0。加去离子水将培养基定容至1L后(此处LB的配置过程已经完成如果不做后面的,高温高压灭菌后4度保存即可),加入15gAgar(此步是在配置一般固体培养基)。高温高压灭菌后,冷却至60°C保存。加入1ml Ampicillin (100mg/ml) / 1ml IPTG(24mg/ml)/2ml X-Gal (20mg/ml)后均匀混合。铺制平板(30~35ml 培养基/90mm 培养皿)。4°C避光保存。

一般固体培养基的配置

配置方法: 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。

Agar ( 琼脂:铺制平板用 )15g/L

Agar (琼脂:铺制顶层琼脂用)7g/L

Agarose (琼脂糖:铺制平板用) 15g/L

Agarose (琼脂糖:铺制顶层琼脂用)7g/L

高温高压灭菌后,戴上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。待培养基冷却至50~60°C时,加入热不稳定物质(如抗生素等),摇动容器充分混匀。铺制平板(30~35ml 培养基/90mm 培养皿)。

小结与补充

Tryptone:胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨(Casein Tryptone) 、胰酶消化酪蛋白胨(Pancreatic digest of casein),是一种优质蛋白胨,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。国产的胰蛋白胨一般是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化而得到,与进口的成分和工艺不同。进口的胰蛋白胨以酪蛋白为基础进行消化,实为胰酪蛋白胨;而国产的是以肉、骨为原料。应注意区分。胰蛋白胨可用于厌氧菌、真菌、肺炎球菌、乳酸杆菌、棒状杆菌、梭状杆菌的生长以及水和水乳等细菌检验;胰蛋白胨适宜于硝酸盐还原试验。胰蛋白胨用于原生物的培养和抑菌或杀菌剂的检测、抗生素和其它抗菌素的检测及配制无菌试验用培养基等。是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在当中它起的主要作用是提供氮源以及生长因子。一般的用量为0.5%~5%。

Yeast extract(YE): 酵母提取物 是以蛋白质含量丰富的食用酵母为原料,采用生物技术,将酵母细胞内的蛋白质、核酸等进行降解后精制而成的天然调味料,主要成分为多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族维生素及微量元素。酵母抽提物具有纯天然、营养丰富、味道鲜美醇厚等优点,在食品工业中应用广泛。国内目前应用Yeast extract最多的是食品加工业和生物培养基,在方便面料包、鸡精粉、酱油、肉制品、食用香精等产品中,Yeast extract已经得到了较好的应用推广,在酱类、膨化食品、饼干糕点、营养保健食品等产品中的应用也在进一步拓展中。

氨苄西林(Ampicillin),又称氨苄青霉素,是一种有机化合物,化学式为C16H19N3O4S,是一种β-内酰胺类抗生素,可治疗多种细菌感染。在我们实验室中作为一个抗生素使用,就是筛选指定的菌落作用的。

IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,Isopropyl β-D-Thiogalactoside):IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质,是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。 在我们实验室还没有使用过。有兴趣可以查询百度。其作用:诱导外源基因的表达,普遍应用于原核表达系统,使其表达量增高,产物稳定,具有易鉴定,易纯化的优点。在原核蛋白表达体系中,如 E.coli(大肠杆菌表达系统),外源基因通常需要诱导剂的诱导才能进行表达。当pUC系列的载体DNA(或其他带有LacZ基因载体DNA)以LacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,IPTG还可以作为具有Lac或Tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。

X-gal也称5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。X–gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。

我一直坚定的相信,做实验需要虔诚,不仅是配试剂还是实验操作,实验结果就是一个照妖镜,你掌握与否看实验结果便知。看了很多试剂配制的文档,没有一个对成分有所说明的,特此自己做了一个随笔。虽然不全但是能满足我的查找参考了。其中其实还有很多小问题,望大家多留言讨论。

例如

W/V 单位是什么?

“W/V”代表质量浓度。质量浓度一般用“W/V”或“m/V”表示每单位体积中质量是多少,单位为“kg/L”或“kg/m3”。如“20%(W/V)的甲醛”应说成“质量浓度为200g/L的甲醛”。“V/V”代表物质浓度,如“20%(V/V)的二氧化硫”应说成“体积分数为0.2(或20%)的二氧化硫”。“W/W”代表质量分数,如“15%(W/W)的硫酸”应说成“质量分数为0.15(或15%)的硫酸”。

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