乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒(时间分辨免疫荧光分析法)
【生产厂家】苏州新波生物技术有限公司
【批准文号】国药准字S0082
【剂 型】试剂盒
【规 格】
【医保类型】
【国家基本药物】否
【英文名】Diagnostic Kit for the Quantitative Detection of Hepatitis B Surface Antigen(time-resolved immunofluorometric assay)
【正文】
【用途】
定量测定人血清中乙型肝炎表面抗原的含量。
【试验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光法(IFMA法)定量检测人血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。以单克隆抗-HBs抗体包被反应板，用铕标记试剂(DTTA-Eu)标记抗-HBs。待测样本加入反应板微孔后，样本中的HBsAg与包被于于微孔表面的单克隆抗体结合。洗涤后，加入铕标记的抗-HBs(抗-HBs-DTTA-Eu)，抗-HBs-DTTA-Eu与结合在板上的HBsAg反应，在微孔表面形成免疫复合物:抗-HBs—HBsAg—抗-HBs-DTTA-Eu。洗涤除去游离的铕标记抗-HBs，加入增强液将复合物上的Eu3+解离到溶液中，并与增强液中的有效成份形成高荧光强度的螯合物,其荧光强度与样本中的HBsAg浓度成正比。通过剂量－反应曲线得出样本HBsAg浓度值。
【主要组成成分】
1.HBsAg校准品(已用中国药品生物制品检定所标准校正):1ml/瓶
A 0ng/ml B 0.2ng/ml C 1.0ng/ml D 5.0ng/ml E 25.0ng/ml F 150.0ng/ml
2.铕标记物:1瓶(0.4ml)，使用前按需求量做1:50倍稀释
3.浓缩洗液:1瓶(40ml)，使用前用去离子水作1:25倍稀释
4.铕标记稀释液:1瓶(20ml)
5.微孔反应板:一块(12×8，包被有抗-HBs的单克隆抗体)
6.增强液:1瓶(20ml)
7.封片:3片(封板用)
8.说明书:1份
9.自封袋:1只
10.Tip头:20支
【适用仪器】
用WALLAC公司时间分辨荧光测定仪(1230、1234、1235、1420)或上海新波生物技术有限公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪测量
【样本要求】
血清样本
【试验方法】
见操作流程表
1．试剂的准备
(1)洗涤液:将40mL浓缩洗液和960mL去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。
(2)铕标记物:使用前一小时内用铕标记稀释液按1:50倍稀释并一次用完(使用一次性的塑料容器来配制)。
2．将试剂及所需数量的微孔反应条置室温(室温专指20-25℃范围，下同)平衡。
3．吸取100ulHBsAg校准品及待检样本，按顺序加入微孔反应条小孔中并加贴封片。
4．微孔反应条在室温条件下，用振荡仪缓慢振摇孵育40分钟。
5．在第一次孵育结束后，小心将微孔反应条上的封片揭下并弃掉，将微孔反应条放入洗板机吸干各孔并每孔注入洗涤液400ul，再吸干各孔，重复以上洗涤4次，最后一次将微孔反应条拍干。
6．每孔中加入100ul铕标记物工作液，并加贴封片。
7．微孔反应条在室温条件下，用振荡仪缓慢振摇孵育40分钟。
8．第二次孵育结束后，小心将微孔反应条上的封片揭下并弃掉，将微孔反应条放入洗板机吸干各孔并每孔注入洗涤液400ul，再吸干各孔，重复以上洗涤6次，最后一次将微孔反应条拍干。
9．每一孔中加入增强液100ul(加样过程中避免碰到小孔边缘或其中的试剂，尽量避免污染)，并加贴封片。
10．微孔反应条在室温下，用振荡仪轻摇5分钟(在半小时内完成测定)。
11．使用乙肝表面抗原定量测定试剂盒时必须使用6个校准品，或者使用两点定标方法。每次更换批号时必须使用试剂盒所提供的6个校准品作出曲线(双对数)，校准品复孔使用以保证准确性。血样中HBsAg浓度通过标定曲线得出。检查程序的参数是否如下所示。如不符，则修改。
分析类型:IFMA(时间分辨免疫荧光法)
曲线拟合方式:样条曲线 X轴:LOGY轴:LOG-B
BLANKS(背景孔数):2校准品复孔数:2
校准品浓度:0.2 校准品浓度:1.0校准品浓度:5.0
校准品浓度:25.0 校准品浓度:150.0 待测样本孔数:1
【对试验结果的解释】
结果判读:建议浓度值≥0.2ng/ml的样品判断为阳性，否则为阴性。浓度值＞150ng/ml的血样应稀释后再计算浓度值，稀释后浓度值应在线性范围内。
以下三点如不符合要求，应重新进行实验。
(1)A点计数值应＜5000，F点计数值应＞1000000。
(2)剂量反应曲线的线性相关系数r值应＞0.9800。
(3)典型的剂量反应曲线
【该试验方法的局限性】
血样成份复杂，存在多种未知的干扰因素，可能造成假阴性或假阳性结果；单项检测结果临床只能作为参考。
【产品性能指标】
1.本试剂盒测定范围:0.2ng/ml-150ng/ml；
2.典型的剂量反应曲线见右图；
3.HBsAg adr亚型的最低检出量为0.2ng/ml,adw亚型的最低检出量为1.0ng/ml，ay亚型的最低检出量为1.0ng/ml；
4.剂量－反应曲线的线性相关系数r值应＞0.9800。
【注意事项】
1.理解本说明书对于成功的使用本试剂盒是很重要的，试剂盒中所提供的试剂是一个整体，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。
2.尽量建立一个干净无尘的试验室环境，对试验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含很多金属离子，会影响试验结果)。
3.试剂盒与待检样本使用前必须达到室温。
4.为保证实验的准确性，处理血样时应做到没有纤维蛋白、红细胞等，并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。建议不使用高血脂、高胆红素和高血红蛋白样本。
5.洗板机在每天使用时应进行校正注液量和残留量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔中的洗涤液都注满微孔，洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水可扣在吸水纸上拍干。
6.吸取增强液和铕标记物时，请使用试剂盒提供的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增强液时吸头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂造成增强液的污染。
7.使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。
8.使用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入铕标记物原液中。
9.封片不能重复使用。
10.如需稀释标本，请用小牛血清稀释。
11.所有的样品和本试剂盒应作为潜在的传染源看待，请按传染病实验室检查规程操作。
12.如对实验结果有疑问，应重复试验。
【包装、规格】
96人份/盒
【贮存】
本试剂盒应置2～8℃保存。
【有效期】
以生产日期起有效期为12个月。
HBsAg定量测定试剂盒(IFMA法)操作流程表:
【批准文号】
