冠状病毒(变异株)IgG抗体检测试剂盒(间接免疫荧光法)
【生产厂家】中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
【批准文号】国药试字S0002
【剂 型】检测试剂盒
【规 格】20人份
【医保类型】
【国家基本药物】否
【药品名称】
冠状病毒(变异株)IgG抗体检测试剂盒(间接免疫荧光法)
【用途与原理】
本品系用军事医学科学院微生物流行病研究所分离的冠状病毒（变异株）感染VERO E6细胞，然后将感染细胞固定在10孔镀膜玻片上制成抗原片，采用间接免疫荧光法原理定性检测人血清样品中的冠状病毒（变异株）IgG抗体。
本品可试用于该冠状病毒（变异株）感染的辅助诊断。但鉴于本品使用的局限性，检测结果目前仅供临床参考，最终诊断应紧密结合其它临床指征综合考虑。由于从病毒感染到机体产生抗体需一定时间、产生抗体的强度存在个体差异、本试剂盒的敏感性尚未经研究确认，故抗体检测为阴性者也不能排除被冠状病毒（变异株）感染的可能。
【试剂盒组份】
1.病毒感染细胞抗原片5张
2.病毒IgG抗体阳性对照 100μl
3.阴性血清对照100μl
4.抗人IgG荧光抗体 40μl
5.荧光抗体稀释液 1000μl
6.标本血清稀释液 2000μl
7.试剂盒使用说明书 1份
【样品要求】
首先将待检病人血清标本用血清标本稀释液进行1:10稀释，然后，56℃ 30min灭活。
【仪器】
荧光显微镜。
【操作步骤】
1.将病毒抗原片取出，室温放置5min，使抗原片温度至室温。
2.将灭活后的待检病人血清再倍比稀释，使之成为1:20。每份标本血清取1:10和1:20两个稀释度，每个稀释度取10μl，分别滴加在抗原片的不同孔上（如上图）。
3.置玻片于湿盒中37℃作用30min。将玻片取出，自来水冲洗，晾干。
4.用荧光抗体稀释液将标记的抗人μ链荧光抗体进行1:40稀释（取1份标记抗体加39份荧光抗体稀释液），然后滴加到抗原片上，每孔10μl。
5.置玻片于湿盒中37℃作用30min。冲洗同前，晾干。
6.荧光显微镜下观察染色结果。根据胞浆或胞膜部位有无特异荧光染色来判断结果。
【质量控制】
每个抗原片必须同时设阳性血清和阴性血清对照。阳性对照应呈阳性结果，阴性对照应呈阴性结果，否则试验无效。
【结果判断】
胞浆或胞膜部位有特异荧光染色为阳性，无特异荧光为阴性。阳性可依据荧光亮度和阳性细胞的多少综合判定分别记为“+~++++”，阴性记为“－”。
【本检测方法的局限性】
1.由于从病毒感染到机体产生抗体需经一定时间、抗体的强度存在个体差异，鉴于目前的特殊情况，本品尚未经规范的临床考核，本试剂盒的灵敏度和特异性尚需进一步研究确认，因此抗体检测为阴性者不能排除被冠状病毒（变异株）感染的可能，对抗体检测阳性者也应结合其它临床指征综合考虑。
2.根据机体感染后产生抗体的基础理论，机体被病毒感染后，特异性IgM抗体产生较早，持续时间较短；IgG抗体产生较晚，持续时间较IgM抗体长。另外特异性抗体的产生与感染抗原的量及抗原的抗原性强度相关。由于目前对于抗该病毒抗体的出现、消长等确切时间尚不清楚，所以应将本品IgG抗体检测结果、IgM抗体检测结果、采样时间、临床指征及出现时间等综合起来考虑。
3.本品系采用解放军军事科学院微生物流行病研究所从此次（2002年11月开始）流行的“非典型肺炎”病例标本中分离得到的冠状病毒（变异株）作为抗原制备的间接免疫荧光法试剂盒，阳性结果可显示血清样本中存在该冠状病毒（变异株）的特异抗体。据WHO及有关文献报道，新型的冠状病毒可能是此次“非典型肺炎”的主要病原体。但本品采用的病毒株是否与目前国内流行的所有“非典”病原体完全一致，尚需进一步确认。
【注意事项】
1.病人血清样品的采集及检测过程须按照卫生部公布的《非典型肺炎病例实验室检测标本采集技术指南（试行）》。
2.关于安全问题：（1）虽然本品所附阳性对照血清、阴性对照血清及样本血清均已经56℃、30分钟灭活，但由于尚未证明可完全使病毒灭活，故仍必须按传染物处理，避免造成污染。（2）实验中所用各种废弃物也都应按传染物处理。
3.要自备2－20μl和20－200μl移液器各一支。
4.荧光抗体要根据每次需要量现稀释，一般一张抗原玻片，取5μl荧光抗体加190μl稀释液即可。
5.染色操作中，在往抗原片上滴加标本血清和标记抗体时，注意不要划掉玻片上的细胞。
6.染色过程中，滴加样品时应防止液体外溢和干燥，冲洗要彻底。
7.荧光显微镜下观察时要仔细，防止漏掉弱阳性，同时要注意区别非特异荧光颗粒与特异荧光染色。
【规格】
20人份
【储藏】
-40℃保存
【有效期】
6个月
【批准文号】
国药试字S0002
【研制单位】
企业名称：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
地址：北京丰台区东大街20号
