冠状病毒(变异株)IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
【生产厂家】北京华大吉比爱生物技术有限公司
【批准文号】国药准字S0073
【剂 型】检测试剂盒
【规 格】96人份
【医保类型】
【国家基本药物】否
【正文】
冠状病毒（变异株）IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
一、原理和用途
本品系用军事医学科学院微生物流行病研究所分离的冠状病毒（变异株）感染正常VERO E6细胞，经培养后，将冠状病毒（变异株）裂解液和VERO E6超声粉碎的细胞液包被微孔板，与酶标记的抗人IgG及其它试剂制成试剂盒，采用间接ELISA法定性检测人血清或血浆中的冠状病毒（变异株）IgG抗体。
本品可试用于上述冠状病毒（变异株）感染的辅助诊断。但鉴于本品使用的局限性，检测结果目前仅供临床参考，最终诊断应紧密结合其它临床指征综合考虑。由于从病毒感染到机体产生抗体需一定时间、产生抗体的强度存在个体差异、本试剂盒的敏感性尚未经研究确认，故抗体检测为阴性者也不能排除被冠状病毒（变异株）感染的可能。
二、试剂盒组份
1.冠状病毒抗原包被板
96孔×1块
7. 底物液A
6.5ml×1瓶
2.酶标抗体工作液
12.5ml×1瓶
8. 底物液B
6.5ml×1瓶
3.样品稀释液
12.5ml×1瓶
9. 终止液
6.5ml×1瓶
4.50倍浓缩洗涤液
18ml×1瓶
10. 使用说明书
1份
5.阳性对照血清
0.2ml×1瓶
11.封口胶
2张
6.阴性对照血清
0.2ml×1瓶
12.塑料袋
1个
三、样品要求
按《非典型肺炎病例实验室检测标本采集技术指南（试行）》采集新鲜血清样本并进行灭活处理。
四、仪器
酶标仪。
五、操作步骤
1、每次试验设空白对照、阳性对照1孔、阴性对照2孔。空白孔不加液体；阴、阳性对照无需稀释直接取50μl加入阴、阳性对照孔中；其余检测孔加入样品稀释液，每孔100μl，再加入待测样品10μl。充分混匀，贴上封口胶，置37℃温育30分钟。
2、将50倍浓缩洗板液用双蒸水50倍稀释后用于洗涤板孔。
3、弃去各孔中样品，每孔加满洗液，静置数秒后弃去，重复5次，拍干。
4、每孔加入酶标抗人IgG工作液100μl，贴上封口胶。置37℃温育20分钟。
5、弃去各孔中液体，用洗板液反复洗涤5次，拍干。
6、每孔加入底物液A 50μl，再加入底物液B 50μl，轻拍混匀，置37℃避光温育10分钟。
7、显色完毕后，每孔加入终止液 50μl，轻拍混匀，立即以空白孔调零，置酶标仪450nm波长下测定OD值（参考波长为630nm）。
六、质量控制
1、阳性对照血清OD值有效范围：≥0.50
2、阴性对照血清OD值有效范围：≤0.10
否则试验无效。
七、结果判定
1、阴、阳性对照血清和被检样本血清的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
2、若阴性对照血清OD均值小于0.05按0.05计算。
3、临界值（cut off值）的设定：
cut off值= 0.13+阴性对照血清OD均值
4、被检样本血清的OD值大于临界值应判为冠状病毒（变异株）IgG抗体阳性，小于临界值判为阴性，临界值附近建议重新检测，复测阳性则判为阳性，否则判为阴性。
八、本检测方法的局限性
1、由于从病毒感染到机体产生抗体需经一定时间、抗体的强度存在个体差异，鉴于目前的特殊情况，本品尚未经规范的临床考核，本试剂盒的灵敏度和特异性尚需进一步研究确认，因此抗体检测为阴性者不能排除被冠状病毒（变异株）感染的可能，对抗体检测阳性者也应结合其它临床指征综合考虑。
2、根据机体感染后产生抗体的基础理论，机体被病毒感染后，特异性IgM抗体产生较早，持续时间较短；IgG抗体产生较晚，持续时间较IgM抗体长。另外特异性抗体的产生与感染抗原的量及抗原的抗原性强度相关。由于目前对于抗该病毒抗体的出现、消长等确切时间尚不清楚，所以应将本品IgG抗体检测结果、IgM抗体检测结果、采样时间、临床指征及出现时间等综合起来考虑。
3、本品系采用解放军军事科学院微生物流行病研究所从此次（2002年11月开始）流行的“非典型肺炎”病例标本中分离得到的冠状病毒（变异株）作为抗原制备的酶联免疫试剂盒，阳性结果可显示血清样本中存在该冠状病毒（变异株）的特异抗体。据WHO及有关文献报道，新型的冠状病毒可能是此次“非典型肺炎”的主要病原体。但本品采用的病毒株是否与目前国内流行的所有“非典”病原体完全一致，尚需进一步确认。
九、注意事项
1、病人血清样品的采集及检测过程须按照卫生部公布的《非典型肺炎病例实验室检测标本采集技术指南（试行）》。
2、关于安全问题：（1）虽然本品所附阳性对照血清、阴性对照血清及样本血清均已经灭活，但由于尚未证明可完全使病毒灭活，故仍必须按传染物处理，避免造成污染。（2）实验中所用各种废弃物也都应按传染物处理。
3、各步加液均应使用加液器并经常校对其准确性，以避免实验误差。
4、封口胶只限一次性使用，以避免交叉污染。
5、洗涤时各孔均需加满洗液，防止因洗涤不充分造成非特异性反应。
6、微孔条从冷藏环境中取出应在室温平衡后再打开密封袋，未用完者须放入有干燥剂的密封袋保存。
十、保存条件及有效期
[规格]96人份
[储藏]2℃-8℃避光保存
[有效期]暂定6个月。
[生产单位]北京华大吉比爱生物技术有限公司
[地址]北京市顺义空港工业区B区6号
邮编：101300
电话：（010）80492001
传真：（010）80492118
[研制单位]军事医学科学院微生物流行病研究所 中国科学院北京基因组研究组
